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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 3j9i | ||||||
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タイトル | Thermoplasma acidophilum 20S proteasome | ||||||
要素 |
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キーワード | HYDROLASE (加水分解酵素) / proteasome (プロテアソーム) | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 proteasome endopeptidase complex / proteasome core complex, beta-subunit complex / proteasome core complex, alpha-subunit complex / threonine-type endopeptidase activity / proteasomal protein catabolic process / ubiquitin-dependent protein catabolic process / endopeptidase activity / 細胞質基質 / 細胞質 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Thermoplasma acidophilum (好酸性) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.3 Å | ||||||
データ登録者 | Li, X. / Mooney, P. / Zheng, S. / Booth, C. / Braunfeld, M.B. / Gubbens, S. / Agard, D.A. / Cheng, Y. | ||||||
引用 | ジャーナル: Nat Methods / 年: 2013 タイトル: Electron counting and beam-induced motion correction enable near-atomic-resolution single-particle cryo-EM. 著者: Xueming Li / Paul Mooney / Shawn Zheng / Christopher R Booth / Michael B Braunfeld / Sander Gubbens / David A Agard / Yifan Cheng / 要旨: In recent work with large high-symmetry viruses, single-particle electron cryomicroscopy (cryo-EM) has achieved the determination of near-atomic-resolution structures by allowing direct fitting of ...In recent work with large high-symmetry viruses, single-particle electron cryomicroscopy (cryo-EM) has achieved the determination of near-atomic-resolution structures by allowing direct fitting of atomic models into experimental density maps. However, achieving this goal with smaller particles of lower symmetry remains challenging. Using a newly developed single electron-counting detector, we confirmed that electron beam-induced motion substantially degrades resolution, and we showed that the combination of rapid readout and nearly noiseless electron counting allow image blurring to be corrected to subpixel accuracy, restoring intrinsic image information to high resolution (Thon rings visible to ∼3 Å). Using this approach, we determined a 3.3-Å-resolution structure of an ∼700-kDa protein with D7 symmetry, the Thermoplasma acidophilum 20S proteasome, showing clear side-chain density. Our method greatly enhances image quality and data acquisition efficiency-key bottlenecks in applying near-atomic-resolution cryo-EM to a broad range of protein samples. #1: ジャーナル: To be Published タイトル: Side-chain-directed model and map validation for 3D electron cryomicroscopy 著者: Barad, B.A. / Echols, N. / Wang, R.Y.-R. / Cheng, Y. / DiMaio, F. / Adams, P.D. / Fraser, J.S. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 3j9i.cif.gz | 962.8 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb3j9i.ent.gz | 775.5 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 3j9i.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j9/3j9i ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/j9/3j9i | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
#1: タンパク質 | 分子量: 24776.281 Da / 分子数: 14 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Thermoplasma acidophilum (好酸性) / 遺伝子: psmA, Ta1288 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P25156, proteasome endopeptidase complex #2: タンパク質 | 分子量: 22294.848 Da / 分子数: 14 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Thermoplasma acidophilum (好酸性) / 遺伝子: psmB, Ta0612 / 発現宿主: Escherichia coli (大腸菌) / 参照: UniProt: P28061, proteasome endopeptidase complex |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 |
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分子量 | 値: 0.7 MDa / 実験値: YES | ||||||||||||||||
試料 | 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | ||||||||||||||||
試料支持 | 詳細: Quantifoil grid | ||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK III / 凍結剤: ETHANE / Temp: 120 K / 湿度: 100 % / 詳細: Plunged into liquid ethane (FEI VITROBOT MARK III) |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Tecnai Polara / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI POLARA 300 / 日付: 2012年6月1日 |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 31000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 1900 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 800 nm / Cs: 2 mm |
撮影 | 電子線照射量: 20 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K2 (4k x 4k) |
画像スキャン | デジタル画像の数: 600 |
放射波長 | 相対比: 1 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | 詳細: Each Particle | ||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: D7 (2回x7回 2面回転対称) | ||||||||||||||||
3次元再構成 | 手法: FREALIGN / 解像度: 3.3 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 126729 / ピクセルサイズ(公称値): 1.2156 Å / ピクセルサイズ(実測値): 1.2156 Å / 詳細: Gold Standard FSC, imposed symmetry: D7 / Refinement type: HALF-MAPS REFINED INDEPENDENTLY / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: FLEXIBLE FIT / 空間: REAL / 詳細: REFINEMENT PROTOCOL--Flexible | ||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 1PMA Accession code: 1PMA / Source name: PDB / タイプ: experimental model | ||||||||||||||||
精密化ステップ | サイクル: LAST
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