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-基本情報
登録情報 | データベース: PDB / ID: 7qv9 | ||||||
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タイトル | CryoEM structure of bacterial transcription intermediate complex mediated by activator PspF | ||||||
要素 |
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キーワード | TRANSCRIPTION (転写 (生物学)) / RNA polymerase (RNAポリメラーゼ) / AAA protein / transcription regulation / cryoEM (低温電子顕微鏡法) | ||||||
機能・相同性 | 機能・相同性情報 RNA polymerase complex / DNA-binding transcription activator activity / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / sigma factor activity / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation ...RNA polymerase complex / DNA-binding transcription activator activity / submerged biofilm formation / cellular response to cell envelope stress / cytosolic DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription initiation / bacterial-type flagellum assembly / sigma factor activity / bacterial-type flagellum-dependent cell motility / nitrate assimilation / nucleotidyltransferase activity / transcription elongation factor complex / DNA-directed RNA polymerase complex / regulation of DNA-templated transcription elongation / transcription antitermination / 運動性 / DNA-templated transcription initiation / ribonucleoside binding / DNA-directed 5'-3' RNA polymerase activity / ポリメラーゼ / response to heat / protein-containing complex assembly / intracellular iron ion homeostasis / protein dimerization activity / response to antibiotic / magnesium ion binding / DNA binding / zinc ion binding / 生体膜 / 細胞質基質 / 細胞質 類似検索 - 分子機能 | ||||||
生物種 | Escherichia coli K-12 (大腸菌) Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) | ||||||
手法 | 電子顕微鏡法 / 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 3.5 Å | ||||||
データ登録者 | Ye, F.Z. / Zhang, X.D. | ||||||
資金援助 | 英国, 1件
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引用 | ジャーナル: Sci Adv / 年: 2022 タイトル: Mechanisms of DNA opening revealed in AAA+ transcription complex structures. 著者: Fuzhou Ye / Forson Gao / Xiaojiao Liu / Martin Buck / Xiaodong Zhang / 要旨: Gene transcription is carried out by RNA polymerase (RNAP) and requires the conversion of the initial closed promoter complex, where DNA is double stranded, to a transcription-competent open promoter ...Gene transcription is carried out by RNA polymerase (RNAP) and requires the conversion of the initial closed promoter complex, where DNA is double stranded, to a transcription-competent open promoter complex, where DNA is opened up. In bacteria, RNAP relies on σ factors for its promoter specificities. Using a special form of sigma factor (σ), which forms a stable closed complex and requires its activator that belongs to the AAA+ ATPases (ATPases associated with diverse cellular activities), we obtained cryo-electron microscopy structures of transcription initiation complexes that reveal a previously unidentified process of DNA melting opening. The σ amino terminus threads through the locally opened up DNA and then becomes enclosed by the AAA+ hexameric ring in the activator-bound intermediate complex. Our structures suggest how ATP hydrolysis by the AAA+ activator could remove the σ inhibition while helping to open up DNA, using σ amino-terminal peptide as a pry bar. | ||||||
履歴 |
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-構造の表示
構造ビューア | 分子: MolmilJmol/JSmol |
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-ダウンロードとリンク
-ダウンロード
PDBx/mmCIF形式 | 7qv9.cif.gz | 1002.8 KB | 表示 | PDBx/mmCIF形式 |
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PDB形式 | pdb7qv9.ent.gz | 798.4 KB | 表示 | PDB形式 |
PDBx/mmJSON形式 | 7qv9.json.gz | ツリー表示 | PDBx/mmJSON形式 | |
その他 | その他のダウンロード |
-検証レポート
アーカイブディレクトリ | https://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/qv/7qv9 ftp://data.pdbj.org/pub/pdb/validation_reports/qv/7qv9 | HTTPS FTP |
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-関連構造データ
関連構造データ | 14171MC 7qwpC 7qxiC M: このデータのモデリングに利用したマップデータ C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
-集合体
登録構造単位 |
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1 |
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-要素
-DNA-directed RNA polymerase subunit ... , 4種, 5分子 ABCDE
#1: タンパク質 | 分子量: 36558.680 Da / 分子数: 2 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: rpoA, pez, phs, sez, b3295, JW3257 / プラスミド: pGEXABC / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): Escherichia coli / 参照: UniProt: P0A7Z4, ポリメラーゼ #2: タンパク質 | | 分子量: 150820.875 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 株: K12 遺伝子: rpoB, groN, nitB, rif, ron, stl, stv, tabD, b3987, JW3950 プラスミド: pGEXABC / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): Escherichia coli / 参照: UniProt: P0A8V2, ポリメラーゼ #3: タンパク質 | | 分子量: 155366.781 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: rpoC, tabB, b3988, JW3951 / プラスミド: pGEXABC / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): Escherichia coli / 参照: UniProt: P0A8T7, ポリメラーゼ #4: タンパク質 | | 分子量: 10249.547 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 株: K12 / 遺伝子: rpoZ, b3649, JW3624 / プラスミド: pGEXABC / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): Escherichia coli / 参照: UniProt: P0A800, ポリメラーゼ |
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-DNA鎖 , 2種, 2分子 NT
#5: DNA鎖 | 分子量: 19439.387 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) |
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#6: DNA鎖 | 分子量: 19404.410 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 合成 / 由来: (合成) Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) |
-タンパク質 , 2種, 7分子 abcdfeM
#7: タンパク質 | 分子量: 33187.777 Da / 分子数: 6 / 由来タイプ: 組換発現 / 由来: (組換発現) Escherichia coli K-12 (大腸菌) / 遺伝子: pspF / プラスミド: pET28b-PspF / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): BL21(DE3) / Variant (発現宿主): Escherichia coli #8: タンパク質 | | 分子量: 53978.656 Da / 分子数: 1 / 由来タイプ: 組換発現 詳細: MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMKQGLQLRLSQQLAMTPQLQQAIRLLQLSTLELQQELQQALESNPLLEQTDLHDEVEAKEVEDRESLDTVDALEQKEMPD ELPLDASWDEIYTAGTPSGNGVDYQDDELPVYQGETTQTLQDYLMWQVELTPFTDTDRAIATSIVDAVDDTGYLTIQIED ...詳細: MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMKQGLQLRLSQQLAMTPQLQQAIRLLQLSTLELQQELQQALESNPLLEQTDLHDEVEAKEVEDRESLDTVDALEQKEMPD ELPLDASWDEIYTAGTPSGNGVDYQDDELPVYQGETTQTLQDYLMWQVELTPFTDTDRAIATSIVDAVDDTGYLTIQIED IVDSIGDDEIGLEEVEAVLKRIQRFDPVGVAAKDLRDCLLIQLSQFAKETPWLEEARLIISDHLDLLANHDFRTLMRVTR LKEEVLKEAVNLIQSLDPRPGQSIQTSEPEYVIPDVLVRKVSGRWTVELNADSIPRLKINQQYAAMGNSARNDADGQFIR SNLQEARWLIKSLESRNDTLLRVSRCIVEQQQAFFEQGEEYMKPMVLADIAQAVEMHESTISRVTTQKYLHSPRGIFELK YFFSSHVNTEGGGEASSTAIRALVKKLIAAENPAKPLSDSKLTSMLSEQGIMVARRTVAKYRESLSIPPSNQRKQLV 由来: (組換発現) Klebsiella pneumoniae (肺炎桿菌) 遺伝子: rpoN, A7B01_01570, B4U61_10775, B5L96_24890, BANRA_03272, BL124_00020515, BN49_0508, BS595_02095, C3F39_17700, DDJ63_09965, DRB11_15360, EAO17_11045, FXN67_08250, G5637_17550, G7Z27_02650, ...遺伝子: rpoN, A7B01_01570, B4U61_10775, B5L96_24890, BANRA_03272, BL124_00020515, BN49_0508, BS595_02095, C3F39_17700, DDJ63_09965, DRB11_15360, EAO17_11045, FXN67_08250, G5637_17550, G7Z27_02650, GJJ08_002620, GJJ12_002565, GNE24_14685, GNG14_08115, GPZ86_02700, HV479_13895, NCTC13465_03419, NCTC3279_03959, NCTC5047_03164, SAMEA3499874_03190, SAMEA3499901_03507, SAMEA3500057_00079, SAMEA3512100_03793, SAMEA3538828_04129, SAMEA3649733_03935, SAMEA3649758_00080, SAMEA3720909_03353, SAMEA3727630_04208, SAMEA3727643_03388, SAMEA3727679_00080, SAMEA3729663_03804, SAMEA4364603_00630, SAMEA4873632_04262 プラスミド: pET28b-sigma54 / 発現宿主: Escherichia coli BL21(DE3) (大腸菌) / 株 (発現宿主): Escherichia coli BL21(DE3 / 参照: UniProt: A0A0N9UTC1 |
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-非ポリマー , 2種, 9分子
#9: 化合物 | ChemComp-ADP / #10: 化合物 | ChemComp-AF3 / |
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-詳細
研究の焦点であるリガンドがあるか | Y |
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-実験情報
-実験
実験 | 手法: 電子顕微鏡法 |
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EM実験 | 試料の集合状態: PARTICLE / 3次元再構成法: 単粒子再構成法 |
-試料調製
構成要素 | 名称: Bacterial transcription intermediate complex mediated by PspF activator protein タイプ: COMPLEX / Entity ID: #1-#8 / 由来: MULTIPLE SOURCES | |||||||||||||||||||||||||
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分子量 | 値: 0.71 MDa / 実験値: NO | |||||||||||||||||||||||||
緩衝液 | pH: 8 | |||||||||||||||||||||||||
緩衝液成分 |
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試料 | 濃度: 3.5 mg/ml / 包埋: NO / シャドウイング: NO / 染色: NO / 凍結: YES | |||||||||||||||||||||||||
試料支持 | グリッドの材料: COPPER / グリッドのサイズ: 200 divisions/in. / グリッドのタイプ: Quantifoil R2/2 | |||||||||||||||||||||||||
急速凍結 | 装置: FEI VITROBOT MARK IV / 凍結剤: ETHANE / 湿度: 95 % / 凍結前の試料温度: 277 K |
-電子顕微鏡撮影
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |
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顕微鏡 | モデル: FEI TITAN KRIOS |
電子銃 | 電子線源: FIELD EMISSION GUN / 加速電圧: 300 kV / 照射モード: FLOOD BEAM |
電子レンズ | モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / 倍率(公称値): 81000 X / 最大 デフォーカス(公称値): 2600 nm / 最小 デフォーカス(公称値): 1400 nm / Cs: 2.7 mm / C2レンズ絞り径: 50 µm / アライメント法: COMA FREE |
試料ホルダ | 凍結剤: NITROGEN 試料ホルダーモデル: FEI TITAN KRIOS AUTOGRID HOLDER |
撮影 | 平均露光時間: 4.1 sec. / 電子線照射量: 50 e/Å2 / フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 (6k x 4k) / 撮影したグリッド数: 1 / 実像数: 14780 |
電子光学装置 | エネルギーフィルター名称: GIF Bioquantum / エネルギーフィルタースリット幅: 20 eV |
画像スキャン | 横: 5760 / 縦: 4092 |
-解析
EMソフトウェア |
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CTF補正 | タイプ: PHASE FLIPPING AND AMPLITUDE CORRECTION | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
粒子像の選択 | 選択した粒子像数: 2000000 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
対称性 | 点対称性: C1 (非対称) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3次元再構成 | 解像度: 3.5 Å / 解像度の算出法: FSC 0.143 CUT-OFF / 粒子像の数: 33285 / アルゴリズム: FOURIER SPACE / クラス平均像の数: 1 / 対称性のタイプ: POINT | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | プロトコル: RIGID BODY FIT / 空間: REAL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
原子モデル構築 | PDB-ID: 5NSS |