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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-28065 | |||||||||
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タイトル | Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30 | |||||||||
マップデータ | Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30, focus refined on Cas7-11 | |||||||||
試料 |
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機能・相同性 | CHAT domain / CHAT domain / CRISPR type III-associated protein / RAMP superfamily / defense response to virus / CRISPR-associated RAMP family protein / DUF4209 domain-containing protein / CHAT domain-containing protein 機能・相同性情報 | |||||||||
生物種 | Desulfonema ishimotonii (バクテリア) / synthetic construct (人工物) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / 解像度: 2.53 Å | |||||||||
データ登録者 | Demircioglu FE / Wilkinson ME / Strecker J / Li D / Faure G / Macrae RK / Zhang F | |||||||||
資金援助 | 米国, 2件
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引用 | ジャーナル: Science / 年: 2022 タイトル: RNA-activated protein cleavage with a CRISPR-associated endopeptidase. 著者: Jonathan Strecker / F Esra Demircioglu / David Li / Guilhem Faure / Max E Wilkinson / Jonathan S Gootenberg / Omar O Abudayyeh / Hiroshi Nishimasu / Rhiannon K Macrae / Feng Zhang / 要旨: In prokaryotes, CRISPR-Cas systems provide adaptive immune responses against foreign genetic elements through RNA-guided nuclease activity. Recently, additional genes with non-nuclease functions have ...In prokaryotes, CRISPR-Cas systems provide adaptive immune responses against foreign genetic elements through RNA-guided nuclease activity. Recently, additional genes with non-nuclease functions have been found in genetic association with CRISPR systems, suggesting that there may be other RNA-guided non-nucleolytic enzymes. One such gene from encodes the TPR-CHAT protease Csx29, which is associated with the CRISPR effector Cas7-11. Here, we demonstrate that this CRISPR-associated protease (CASP) exhibits programmable RNA-activated endopeptidase activity against a sigma factor inhibitor to regulate a transcriptional response. Cryo-electron microscopy of an active and substrate-bound CASP complex reveals an allosteric activation mechanism that reorganizes Csx29 catalytic residues upon target RNA binding. This work reveals an RNA-guided function in nature that can be leveraged for RNA-sensing applications in vitro and in human cells. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
添付画像 |
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-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_28065.map.gz | 116.2 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-28065-v30.xml emd-28065.xml | 21 KB 21 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
FSC (解像度算出) | emd_28065_fsc.xml | 11.3 KB | 表示 | FSCデータファイル |
画像 | emd_28065.png | 605.2 KB | ||
マスクデータ | emd_28065_msk_1.map | 125 MB | マスクマップ | |
その他 | emd_28065_half_map_1.map.gz emd_28065_half_map_2.map.gz | 98.3 MB 98.3 MB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-28065 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-28065 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
関連構造データ | 8eeyMC 8eexC M: このマップから作成された原子モデル C: 同じ文献を引用 (文献) |
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類似構造データ | 類似検索 - 機能・相同性F&H 検索 |
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_28065.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 125 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||
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注釈 | Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30, focus refined on Cas7-11 | ||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 0.9945 Å | ||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
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-添付データ
-マスク #1
ファイル | emd_28065_msk_1.map | ||||||||||||
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投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29...
ファイル | emd_28065_half_map_1.map | ||||||||||||
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注釈 | Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30, half map 1 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-ハーフマップ: Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29...
ファイル | emd_28065_half_map_2.map | ||||||||||||
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注釈 | Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30, half map 2 | ||||||||||||
投影像・断面図 |
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密度ヒストグラム |
-試料の構成要素
-全体 : Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30
全体 | 名称: Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30 |
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要素 |
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-超分子 #1: Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30
超分子 | 名称: Cas7-11 in complex with DR-mismatched target RNA, Csx29 and Csx30 タイプ: complex / キメラ: Yes / ID: 1 / 親要素: 0 / 含まれる分子: #1-#5 |
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由来(天然) | 生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア) |
-分子 #1: Csx30
分子 | 名称: Csx30 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 62.688184 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
配列 | 文字列: MNTTTYNTTT DALLEWGKVY FQKEDFSEFL DNLEAYISDA GDSLKDELES GVEKLVLGIK SAEAVIFGEA VIGTTPENEA WYDAEESFL TLDCAVWLSQ ALDRVVRRQD ASLADSLIAR LDEAINRVAE KLYADNLSPL RFSSLNEIRR SALEATDEKY H YLFPWHGA ...文字列: MNTTTYNTTT DALLEWGKVY FQKEDFSEFL DNLEAYISDA GDSLKDELES GVEKLVLGIK SAEAVIFGEA VIGTTPENEA WYDAEESFL TLDCAVWLSQ ALDRVVRRQD ASLADSLIAR LDEAINRVAE KLYADNLSPL RFSSLNEIRR SALEATDEKY H YLFPWHGA ACDVDENILL ILTEEYHLIG ADKAGANLSE ELRGDLPFIF AELERDEVLR AYVEKENALS LALENTMREH WA FGLLEAA RDEGYNHPYP ADVGMRIHQV ARAVFSQTNL SPAERLAVAI AGACFTPEIS EDRRLEILLD CEERVCEIEA PTG DDTSVR VIKDLKALAD HRVRHEIPAE SLVSLWFEQI EAAGTDFDTK TPMDELVLRM LSDNVITLSV DRKAASQTET DDVK PQKGK IIPFPVPDIA NDEVEYQKAV GGGSANDSKV KFPGLLEIQG CRDGDKAILL EDTDDAAANH RKLFSILKAG KLNSA FFIQ SDDGEWVESE SKPTMEDNRI ILHDSHHSSF VWILDTGSMQ LRQSVKCVKD ALNKKTGSAK KLKPKTMIVW VTIPQE G |
-分子 #2: Cas7-11
分子 | 名称: Cas7-11 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 2 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 183.844984 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
配列 | 文字列: MTTTMKISIE FLEPFRMTKW QESTRRNKNN KEFVRGQAFA RWHRNKKDNT KGRPYITGTL LRSAVIRSAE NLLTLSDGKI SEKTCCPGK FDTEDKDRLL QLRQRSTLRW TDKNPCPDNA ETYCPFCELL GRSGNDGKKA EKKDWRFRIH FGNLSLPGKP D FDGPKAIG ...文字列: MTTTMKISIE FLEPFRMTKW QESTRRNKNN KEFVRGQAFA RWHRNKKDNT KGRPYITGTL LRSAVIRSAE NLLTLSDGKI SEKTCCPGK FDTEDKDRLL QLRQRSTLRW TDKNPCPDNA ETYCPFCELL GRSGNDGKKA EKKDWRFRIH FGNLSLPGKP D FDGPKAIG SQRVLNRVDF KSGKAHDFFK AYEVDHTRFP RFEGEITIDN KVSAEARKLL CDSLKFTDRL CGALCVIRFD EY TPAADSG KQTENVQAEP NANLAEKTAE QIISILDDNK KTEYTRLLAD AIRSLRRSSK LVAGLPKDHD GKDDHYLWDI GKK KKDENS VTIRQILTTS ADTKELKNAG KWREFCEKLG EALYLKSKDM SGGLKITRRI LGDAEFHGKP DRLEKSRSVS IGSV LKETV VCGELVAKTP FFFGAIDEDA KQTALQVLLT PDNKYRLPRS AVRGILRRDL QTYFDSPCNA ELGGRPCMCK TCRIM RGIT VMDARSEYNA PPEIRHRTRI NPFTGTVAEG ALFNMEVAPE GIVFPFQLRY RGSEDGLPDA LKTVLKWWAE GQAFMS GAA STGKGRFRME NAKYETLDLS DENQRNDYLK NWGWRDEKGL EELKKRLNSG LPEPGNYRDP KWHEINVSIE MASPFIN GD PIRAAVDKRG TAVVTFVKYK AEGEEAKPVC AYKAESFRGV IRSAVARIHM EDGVPLTELT HSDCECLLCQ IFGSEYEA G KIRFEDLVFE SDPEPVTFDH VAIDRFTGGA ADKKKFDDSP LPGSPARPLM LKGSFWIRRD VLEDEEYCKA LGKALADVN NGLYPLGGKS AIGYGQVKSL GIKGDDKRIS RLMNPAFDET DVAVPEKPKT DAEVRIEAEK VYYPHYFVEP HKKVEREEKP CGHQKFHEG RLTGKIRCKL ITKTPLIVPD TSNDDFFRPA DKEARKEKDE YHKSYAFFRL HKQIMIPGSE LRGMVSSVYE T VTNSCFRI FDETKRLSWR MDADHQNVLQ DFLPGRVTAD GKHIQKFSET ARVPFYDKTQ KHFDILDEQE IAGEKPVRMW VK RFIKRLS LVDPAKHPQK KQDNKWKRRK EGIATFIEQK NGSYYFNVVT NNGCTSFHLW HKPDNFDQEK LEGIQNGEKL DCW VRDSRY QKAFQEIPEN DPDGWECKEG YLHVVGPSKV EFSDKKGDVI NNFQGTLPSV PNDWKTIRTN DFKNRKRKNE PVFC CEDDK GNYYTMAKYC ETFFFDLKEN EEYEIPEKAR IKYKELLRVY NNNPQAVPES VFQSRVAREN VEKLKSGDLV YFKHN EKYV EDIVPVRISR TVDDRMIGKR MSADLRPCHG DWVEDGDLSA LNAYPEKRLL LRHPKGLCPA CRLFGTGSYK GRVRFG FAS LENDPEWLIP GKNPGDPFHG GPVMLSLLER PRPTWSIPGS DNKFKVPGRK FYVHHHAWKT IKDGNHPTTG KAIEQSP NN RTVEALAGGN SFSFEIAFEN LKEWELGLLI HSLQLEKGLA HKLGMAKSMG FGSVEIDVES VRLRKDWKQW RNGNSEIP N WLGKGFAKLK EWFRDELDFI ENLKKLLWFP EGDQAPRVCY PMLRKKDDPN GNSGYEELKD GEFKKEDRQK KLTTPWTPW A |
-分子 #3: Csx29
分子 | 名称: Csx29 / タイプ: protein_or_peptide / ID: 3 / コピー数: 1 / 光学異性体: LEVO |
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由来(天然) | 生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 88.311875 KDa |
組換発現 | 生物種: Escherichia coli (大腸菌) |
配列 | 文字列: MSNPIRDIQD RLKTAKFDNK DDMMNLASSL YKYEKQLMDS SEATLCQQGL SNRPNSFSQL SQFRDSDIQS KAGGQTGKFW QNEYEACKN FQTHKERRET LEQIIRFLQN GAEEKDADDL LLKTLARAYF HRGLLYRPKG FSVPARKVEA MKKAIAYCEI I LDKNEEES ...文字列: MSNPIRDIQD RLKTAKFDNK DDMMNLASSL YKYEKQLMDS SEATLCQQGL SNRPNSFSQL SQFRDSDIQS KAGGQTGKFW QNEYEACKN FQTHKERRET LEQIIRFLQN GAEEKDADDL LLKTLARAYF HRGLLYRPKG FSVPARKVEA MKKAIAYCEI I LDKNEEES EALRIWLYAA MELRRCGEEY PENFAEKLFY LANDGFISEL YDIRLFLEYT EREEDNNFLD MILQENQDRE RL FELCLYK ARACFHLNQL NDVRIYGESA IDNAPGAFAD PFWDELVEFI RMLRNKKSEL WKEIAIKAWD KCREKEMKVG NNI YLSWYW ARQRELYDLA FMAQDGIEKK TRIADSLKSR TTLRIQELNE LRKDAHRKQN RRLEDKLDRI IEQENEARDG AYLR RNPPC FTGGKREEIP FARLPQNWIA VHFYLNELES HEGGKGGHAL IYDPQKAEKD QWQDKSFDYK ELHRKFLEWQ ENYIL NEEG SADFLVTLCR EIEKAMPFLF KSEVIPEDRP VLWIPHGFLH RLPLHAAMKS GNNSNIEIFW ERHASRYLPA WHLFDP APY SREESSTLLK NFEEYDFQNL ENGEIEVYAP SSPKKVKEAI RENPAILLLL CHGEADMTNP FRSCLKLKNK DMTIFDL LT VEDVRLSGSR ILLGACESDM VPPLEFSVDE HLSVSGAFLS HKAGEIVAGL WTVDSEKVDE CYSYLVEEKD FLRNLQEW Q MAETENFRSE NDSSLFYKIA PFRIIGFPAE |
-分子 #4: crRNA
分子 | 名称: crRNA / タイプ: rna / ID: 4 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: Desulfonema ishimotonii (バクテリア) |
分子量 | 理論値: 12.134133 KDa |
配列 | 文字列: UUGAUGUCAC GGAACCUUUG UUGUCUUCGA CAUGGGUA |
-分子 #5: DR-mismatched target RNA
分子 | 名称: DR-mismatched target RNA / タイプ: rna / ID: 5 / コピー数: 1 |
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由来(天然) | 生物種: synthetic construct (人工物) |
分子量 | 理論値: 8.931381 KDa |
配列 | 文字列: UACCCAUGUC GAAGACAACA AAGUAUUU |
-分子 #6: ZINC ION
分子 | 名称: ZINC ION / タイプ: ligand / ID: 6 / コピー数: 4 / 式: ZN |
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分子量 | 理論値: 65.409 Da |
-実験情報
-構造解析
手法 | クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
緩衝液 | pH: 8 |
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凍結 | 凍結剤: ETHANE |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TITAN KRIOS |
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電子線 | 加速電圧: 300 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2.7 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 2.0 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.5 µm |
撮影 | フィルム・検出器のモデル: GATAN K3 BIOQUANTUM (6k x 4k) 平均電子線量: 40.0 e/Å2 |
実験機器 | モデル: Titan Krios / 画像提供: FEI Company |