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タイトルTime resolution in cryo-EM using a PDMS-based microfluidic chip assembly and its application to the study of HflX-mediated ribosome recycling.
ジャーナル・号・ページCell, Vol. 187, Issue 3, Page 782-796.e23, Year 2024
掲載日2024年2月1日
著者Sayan Bhattacharjee / Xiangsong Feng / Suvrajit Maji / Prikshat Dadhwal / Zhening Zhang / Zuben P Brown / Joachim Frank /
PubMed 要旨The rapid kinetics of biological processes and associated short-lived conformational changes pose a significant challenge in attempts to structurally visualize biomolecules during a reaction in real ...The rapid kinetics of biological processes and associated short-lived conformational changes pose a significant challenge in attempts to structurally visualize biomolecules during a reaction in real time. Conventionally, on-pathway intermediates have been trapped using chemical modifications or reduced temperature, giving limited insights. Here, we introduce a time-resolved cryo-EM method using a reusable PDMS-based microfluidic chip assembly with high reactant mixing efficiency. Coating of PDMS walls with SiO virtually eliminates non-specific sample adsorption and ensures maintenance of the stoichiometry of the reaction, rendering it highly reproducible. In an operating range from 10 to 1,000 ms, the device allows us to follow in vitro reactions of biological molecules at resolution levels in the range of 3 Å. By employing this method, we show the mechanism of progressive HflX-mediated splitting of the 70S E. coli ribosome in the presence of the GTP via capture of three high-resolution reaction intermediates within 140 ms.
リンクCell / PubMed:38244547 / PubMed Central
手法EM (単粒子)
解像度3.0 - 4.1 Å
構造データ

EMDB-29681, PDB-8g2u:
Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:control-apo-70S at 900ms
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-29687, PDB-8g31:
Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:2nd Intermediate
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-29688, PDB-8g34:
Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:1st intermediate
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-29689, PDB-8g38:
Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:3rd Intermediate
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-29723: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:3rd Intermediate, 30S focused map
手法: EM (単粒子) / 解像度: 4.1 Å

EMDB-29724: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:2nd Intermediate consensus, 30S focused
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.4 Å

EMDB-29833: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:1st intermediate, 30S focused
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.2 Å

EMDB-29834: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:1st intermediate, 50S focused from 30S subtracted
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.6 Å

EMDB-29842: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:3rd Intermediate, 50S focused and 30S subtracted
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.0 Å

EMDB-29844: Time-resolved cryo-EM study of the 70S recycling by the HflX:2nd Intermediate, 50S focused and 30S subtracted
手法: EM (単粒子) / 解像度: 3.14 Å

化合物

ChemComp-GTP:
GUANOSINE-5'-TRIPHOSPHATE / GTP / GTP, エネルギー貯蔵分子*YM / グアノシン三リン酸

ChemComp-HOH:
WATER /

由来
  • escherichia coli (大腸菌)
キーワードRIBOSOME (リボソーム) / Recycling (リサイクル) / Time-resolved Cryo-EM / 70S / HflX

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万見文献について

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お知らせ

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2022年2月9日: EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

EMDBエントリの付随情報ファイルのフォーマットが新しくなりました

  • EMDBのヘッダファイルのバージョン3が、公式のフォーマットとなりました。
  • これまでは公式だったバージョン1.9は、アーカイブから削除されます。

関連情報:EMDBヘッダ

外部リンク:wwPDBはEMDBデータモデルのバージョン3へ移行します

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2020年8月12日: 新型コロナ情報

新型コロナ情報

URL: https://pdbj.org/emnavi/covid19.php

新ページ: EM Navigatorに新型コロナウイルスの特設ページを開設しました。

関連情報:Covid-19情報 / 2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

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2020年3月5日: 新型コロナウイルスの構造データ

新型コロナウイルスの構造データ

関連情報:万見生物種 / 2020年8月12日: 新型コロナ情報

外部リンク:COVID-19特集ページ - PDBj / 今月の分子2020年2月:コロナウイルスプロテーアーゼ

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2019年1月31日: EMDBのIDの桁数の変更

EMDBのIDの桁数の変更

  • EMDBエントリに付与されているアクセスコード(EMDB-ID)は4桁の数字(例、EMD-1234)でしたが、間もなく枯渇します。これまでの4桁のID番号は4桁のまま変更されませんが、4桁の数字を使い切った後に発行されるIDは5桁以上の数字(例、EMD-12345)になります。5桁のIDは2019年の春頃から発行される見通しです。
  • EM Navigator/万見では、接頭語「EMD-」は省略されています。

関連情報:Q: 「EMD」とは何ですか? / 万見/EM NavigatorにおけるID/アクセスコードの表記

外部リンク:EMDB Accession Codes are Changing Soon! / PDBjへお問い合わせ

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2017年7月12日: PDB大規模アップデート

PDB大規模アップデート

  • 新バージョンのPDBx/mmCIF辞書形式に基づくデータがリリースされました。
  • 今回の更新はバージョン番号が4から5になる大規模なもので、全エントリデータの書き換えが行われる「Remediation」というアップデートに該当します。
  • このバージョンアップで、電子顕微鏡の実験手法に関する多くの項目の書式が改定されました(例:em_softwareなど)。
  • EM NavigatorとYorodumiでも、この改定に基づいた表示内容になります。

外部リンク:wwPDB Remediation / OneDepデータ基準に準拠した、より強化された内容のモデル構造ファイルが、PDBアーカイブで公開されました。

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関連情報:EMDB / PDB / SASBDB / 万見 (Yorodumi) / EMN文献 / 新しいEM Navigatorと万見の変更点

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