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-基本情報
登録情報 | データベース: EMDB / ID: EMD-5026 | |||||||||
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タイトル | Cryo-negative stain structure of the yeast transcription factor TFIID at 20 A resolution | |||||||||
マップデータ | Volume of yeast TFIID filtered to 20 A resolution | |||||||||
試料 |
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キーワード | Transcription factor TFIID / cryo electron microscopy / yeast (酵母) | |||||||||
手法 | 単粒子再構成法 / クライオ電子顕微鏡法 / ネガティブ染色法 / 解像度: 22.0 Å | |||||||||
データ登録者 | Papai G / Tripathi MK / Ruhlmann C / Crucifix C / Jennings JL / Link AJ / Weil PA / Schultz P | |||||||||
引用 | ジャーナル: Structure / 年: 2009 タイトル: Mapping the initiator binding Taf2 subunit in the structure of hydrated yeast TFIID. 著者: Gabor Papai / Manish K Tripathi / Christine Ruhlmann / Sebastiaan Werten / Corinne Crucifix / P Anthony Weil / Patrick Schultz / 要旨: The general transcription factor TFIID is a large multisubunit complex required for the transcription of most protein-encoding genes by RNA polymerase II. Taking advantage of a TFIID preparation ...The general transcription factor TFIID is a large multisubunit complex required for the transcription of most protein-encoding genes by RNA polymerase II. Taking advantage of a TFIID preparation partially depleted in the initiator-binding Taf2p subunit, we determined the conformational and biochemical variations of the complex by electron tomography and cryo-electron microscopy of single molecules. Image analysis revealed the extent of conformational flexibility of the complex and the selection of the most homogeneous TFIID subpopulation allowed us to determine an improved structural model at 23 Angstroms resolution. This study also identified two subpopulations of Taf2p-containing and Taf2p-depleted TFIID molecules. By comparing these two TFIID species we could infer the position of Taf2p, which was confirmed by immunolabeling using a subunit-specific antibody. Mapping the position of this crucial subunit in the vicinity of Taf1p and of TBP sheds new light on its role in promoter recognition. | |||||||||
履歴 |
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-構造の表示
ムービー |
ムービービューア |
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構造ビューア | EMマップ: SurfViewMolmilJmol/JSmol |
添付画像 |
-ダウンロードとリンク
-EMDBアーカイブ
マップデータ | emd_5026.map.gz | 14.2 MB | EMDBマップデータ形式 | |
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ヘッダ (付随情報) | emd-5026-v30.xml emd-5026.xml | 10.2 KB 10.2 KB | 表示 表示 | EMDBヘッダ |
画像 | emd_5026_1.png | 183.2 KB | ||
アーカイブディレクトリ | http://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-5026 ftp://ftp.pdbj.org/pub/emdb/structures/EMD-5026 | HTTPS FTP |
-関連構造データ
-リンク
EMDBのページ | EMDB (EBI/PDBe) / EMDataResource |
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-マップ
ファイル | ダウンロード / ファイル: emd_5026.map.gz / 形式: CCP4 / 大きさ: 15.3 MB / タイプ: IMAGE STORED AS FLOATING POINT NUMBER (4 BYTES) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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注釈 | Volume of yeast TFIID filtered to 20 A resolution | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
ボクセルのサイズ | X=Y=Z: 2.54 Å | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
密度 |
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対称性 | 空間群: 1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
詳細 | EMDB XML:
CCP4マップ ヘッダ情報:
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-添付データ
-試料の構成要素
-全体 : TAp-tag purified yeast TFIID
全体 | 名称: TAp-tag purified yeast TFIID |
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要素 |
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-超分子 #1000: TAp-tag purified yeast TFIID
超分子 | 名称: TAp-tag purified yeast TFIID / タイプ: sample / ID: 1000 / 集合状態: monomeric / Number unique components: 1 |
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分子量 | 実験値: 900 KDa / 理論値: 900 KDa |
-分子 #1: Transcription factor TFIID
分子 | 名称: Transcription factor TFIID / タイプ: protein_or_peptide / ID: 1 / Name.synonym: TFIID / コピー数: 1 / 集合状態: monomer / 組換発現: Yes / データベース: NCBI |
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由来(天然) | 株: YLSTAF1 / 細胞: yeast / 細胞中の位置: nuclear protein |
分子量 | 実験値: 900 MDa / 理論値: 900 MDa |
-実験情報
-構造解析
手法 | ネガティブ染色法, クライオ電子顕微鏡法 |
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解析 | 単粒子再構成法 |
試料の集合状態 | particle |
-試料調製
濃度 | 1.4 mg/mL |
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緩衝液 | pH: 8 / 詳細: 10 mM Tris-HCL, 300 mM NaCl, 20% glycerol |
染色 | タイプ: NEGATIVE 詳細: Thin carbon film with adsorbed protein were floated on 2% w/v uranyl acetate for 30 seconds. |
グリッド | 詳細: 400 mesh copper/rhodium grid with holey carbon |
凍結 | 凍結剤: ETHANE / 装置: HOMEMADE PLUNGER / 詳細: Vitrification instrument: house made / 手法: blot for about 2 seconds before plunging |
-電子顕微鏡法
顕微鏡 | FEI TECNAI F20 |
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電子線 | 加速電圧: 200 kV / 電子線源: FIELD EMISSION GUN |
電子光学系 | 倍率(補正後): 40080 / 照射モード: FLOOD BEAM / 撮影モード: BRIGHT FIELDBright-field microscopy / Cs: 2.0 mm / 最大 デフォーカス(公称値): 1.96 µm / 最小 デフォーカス(公称値): 0.137 µm / 倍率(公称値): 40000 |
試料ステージ | 試料ホルダー: Side entry / 試料ホルダーモデル: GATAN LIQUID NITROGEN |
温度 | 平均: 90 K |
日付 | 2006年9月19日 |
撮影 | カテゴリ: FILM / フィルム・検出器のモデル: KODAK SO-163 FILM / デジタル化 - スキャナー: PRIMESCAN / デジタル化 - サンプリング間隔: 5.1 µm / 実像数: 121 / 平均電子線量: 15 e/Å2 / Od range: 1.4 / ビット/ピクセル: 16 |
実験機器 | モデル: Tecnai F20 / 画像提供: FEI Company |
-画像解析
CTF補正 | 詳細: phase flipping on each particle from one micrograph |
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最終 2次元分類 | クラス数: 700 |
最終 再構成 | アルゴリズム: OTHER / 解像度のタイプ: BY AUTHOR / 解像度: 22.0 Å / 解像度の算出法: FSC 0.5 CUT-OFF / ソフトウェア - 名称: IMAGIC, SPIDER / 使用した粒子像数: 10205 |
詳細 | Most homogeneous particles were sorted out by using several starting models obtained by electron tomography. |